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操作ELISA試劑盒實驗方法標準?
更新時間:2021-05-18   點擊次數(shù):1627次

在試驗室,對試劑預(yù)備一般不太留神,一般的做法是,ELISA試劑盒在試驗時將試劑從冰箱中拿出來即用,而疏忽了這種做法有或許影響后邊溫育時刻不行的疑問,其直接的結(jié)果是對一些弱陽性標本的查看呈現(xiàn)假陰性。
加在孔壁上部的非包被區(qū),易致使非特異吸附。
溫育所需時刻與溫度成反比,即溫度越高,則所需時刻相對較短。

因而在ELISA測定中試劑的預(yù)備zui為要害的是,在試驗開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進行測定,以使試劑盒在運用前與室溫平衡。這么做的目的,首要是為了在后邊的溫育反響進程中,能使反響微孔內(nèi)的溫度能較快地抵達所央求的高度,以滿足測定央求。
現(xiàn)在的產(chǎn)品ELISA試劑盒中的洗板液均需在試驗室運用時對所供應(yīng)的濃縮液稀釋制造,因而稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)確保質(zhì)量。此外,當試劑盒以O(shè)PD為底物時,則底物溶液應(yīng)在反響顯色前暫時制造。

ELISA試劑盒試驗辦法操作規(guī)范,加血清樣本及反響試劑
在現(xiàn)在的ELISA產(chǎn)品試劑盒中,血清樣本的參加幾乎是*的要運用微量加樣器參加樣本的進程。
zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。
運用微量加樣器加樣有必要留神的要害點是:加樣不行太快,要避免加在孔壁上部,不行濺起和發(fā)生氣泡。
加樣太快,無法確保微量加樣的準確性和均一性。
濺起會對鄰近孔發(fā)生污染。

呈現(xiàn)氣泡則反響液界面有區(qū)別。ELISA試劑盒的參加在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要留神滴加的角度外,滴加的速度也很首要,滴加太快,很簡單呈現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這么就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)呈現(xiàn)非特異吸附,然后導致非特異顯色。
有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性,下次測定為陰性,通常就是上述加樣及試劑的過失所構(gòu)成的溫育。
溫育是ELISA測定中影響測定勝敗zui為要害的一個要素。

ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的反響在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*,有必要在必定的溫度條件下反響必定的時刻。

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