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通蔚生物帶您了解細(xì)胞換液的方式有哪些
更新時間:2023-11-27   點(diǎn)擊次數(shù):1430次

細(xì)胞換液是指去除舊的培養(yǎng)基,換成新的培養(yǎng)基以繼續(xù)提供細(xì)胞充足的營養(yǎng)支持。當(dāng)舊培養(yǎng)基 ph 值改變(含酚紅的培養(yǎng)基通常是變酸發(fā)黃)時,需要及時進(jìn)行換液。在培養(yǎng)細(xì)胞的過程中,換液是一項(xiàng)非常常規(guī)操作,它主要是為了清除細(xì)胞在生長過程中產(chǎn)生的各種代謝廢物,補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基,促進(jìn)細(xì)胞生長。細(xì)胞換液主要有全換液和半換液兩種方式,那么,不同方式的換液方法如何更換細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的溶液呢?


換液前工作準(zhǔn)備

環(huán)境準(zhǔn)備:相對密封、防塵、防菌的無菌室


操作者準(zhǔn)備:雙手清潔呈可操作狀態(tài)

物品準(zhǔn)備:超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、裝有75%醫(yī)用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、含血清培養(yǎng)基、巴氏吸管、移液器、廢液缸。


工作準(zhǔn)備:預(yù)熱培養(yǎng)基,酒精棉擦拭培養(yǎng)基瓶外表面后移入生物安全柜/超凈工作臺。

細(xì)胞培養(yǎng)箱中取出的細(xì)胞,酒精棉擦拭培養(yǎng)瓶/皿外表面,移入生物安全柜/超凈工作臺??梢陨缘却?,待生物安全柜中的循環(huán)風(fēng)將試劑瓶和培養(yǎng)瓶的外表面吹拂幾分鐘后,擰開培養(yǎng)基瓶蓋虛掩,擰開培養(yǎng)瓶瓶蓋虛掩,培養(yǎng)皿蓋不用擰。


第一種方式:細(xì)胞全換液

如果是貼壁細(xì)胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補(bǔ)充足量新鮮培養(yǎng)基。


細(xì)胞


細(xì)胞全換液具體步驟

1.將器材放入超凈臺,打開紫外照射滅菌,若是培養(yǎng)的細(xì)胞對溫度比較敏感,可以將含血清的培養(yǎng)基瓶放入37℃的水浴箱使得培養(yǎng)基溫度在37℃,再轉(zhuǎn)移到超凈臺紫外滅菌。另外,細(xì)胞培養(yǎng)間也需要紫外照射半小時左右。


2.從培養(yǎng)箱取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用酒精噴壺在瓶子表面噴灑75%酒精消毒,轉(zhuǎn)移到超凈臺,打開蓋子,輕輕吸出舊的培養(yǎng)液,可用移液器加入新鮮含血清培養(yǎng)基,注意一定不要從細(xì)胞貼壁面加入培養(yǎng)基,應(yīng)從側(cè)壁加,動作輕柔,以免沖落細(xì)胞。


3.加好培養(yǎng)基后,蓋上蓋子,在瓶子上做標(biāo)記,注明換液時間,細(xì)胞種類,操作人員等信息。


4.放入培養(yǎng)箱之前應(yīng)再次用酒精噴一噴瓶子表面,然后應(yīng)記得整理操作臺,用酒精擦拭超凈臺臺面,清理廢液和垃圾。


第二種方式:細(xì)胞半換液

“細(xì)胞半換液"又稱“細(xì)胞半量換液",即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再加一半新的進(jìn)去。選它的原因其實(shí)與前面不加PBS的理由有點(diǎn)相近。


半換液原因

1.給細(xì)胞提供適應(yīng)的緩沖環(huán)境;

2.細(xì)胞生長過程中可能會分泌某些生長因子,促進(jìn)生長;

3.節(jié)省材料

4.方便操作:比如96孔板,換液很麻煩。所以常采用排槍進(jìn)行半換液;

5.對于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng),有時也會選用半換液減低細(xì)胞密度;


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